СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ КЛИНИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСА ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА В КЛИНИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ
Белова Н.Г., Агаркова Л.А. Дата публикации на сайте: 2015-03-31 Доступна также в печатной версии журнала Резюме | Полный текст | Скачать в PDF
Резюме:
Ключевые слова:
ФГБНУ "НИИ акушерства, гинекологии и перинатологии", Томск
Поскольку основной причиной рака шейки матки (РШМ) является вирус папилломы человека (ВПЧ), первичная профилактика должна быть направлена на снижение распространения инфекции в популяции. На сегодняшний день наиболее важным методом профилактики РШМ является скрининговое обследование женского населения на наличие маркера предраковой стадии папилломавирусной инфекции. Выявление ВПЧ высокого риска молекулярно-биологическими методами не позволяет установить стадию инфекции, однако однозначно указывает на наличие или отсутствие инфекции. В связи с этим данная группа методов может использоваться только в совокупности с клиническими методами исследования. В то же время четкое определение принадлежности к группе риска с использованием молекулярных тестов позволяет сфокусировать внимание на отдельных пациентах и тем самым значительно повысить эффективность установления стадии инфекции клиническими методами.
Целью исследования явилось совместное проведение молекулярно-биологических и цитологических исследований, направленных на выявление и количественное определение ДНК вирусов папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска (ВКР) 16,18, 31,33,39,45,51,52,56,58,59 типов в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией и определением вирусной нагрузки (концентрация ДНК ВПЧ на 100 тыс. клеток). Исследование на ВПЧ проводились у 1270 женщин г. Томска, в возрасте 25,3±5,7 лет. Материалом для исследования служил соскоб цервикального канала и/или зоны трансформации, выполненный цервикальной цитологической щеточкой. Измерения выполнены на приборе Rotor Geene 6000 используя тест-системы «амплисенс», которые для выявления ВПЧ высокого риска прошли валидацию на гистологически верифицированных клинических образцах с диагнозом В-ПИП/H-SIL и образцах от женщин без патологии шейки матки верифицированных как «норма» в двойных цитологических исследованиях. В ходе валидации были рассчитаны показатели диагностических чувствительности и специфичности по отношению к тяжелой дисплазии и РШМ (для тестов с введением порога клинической значимости). Количественное исследование на ДНК ВПЧ валидировано и используется только для материала цервикального канала, при условии соблюдения всех правил взятия материала, сохранении щеточки в транспортной среде, использования сорбентных методов выделения ДНК. Количественное выявление ДНК ВПЧ двух основных филогенетических групп – А7, А9, которые включают следующие 10 типов: 16,18,31,33,35,45,52,58,59 – а также ДНК ВПЧ 51 (группа А5) и 56 (группа А6) типов. Эти типы обладают высокой трансформирующей активностью и ответственны более чем за 94% случаев тяжелых цервикальных дисплазий и рака шейки матки. Технологии флуоресцентной детекции по конечной точке и в реальном времени, используемые в тест-системах «амплисенс» (FEP и FRT), позволяют в значительной степени автоматизировать работу, минуя субъективный учет результатов электрофореграмм и получая результаты измерений непосредственно в компьютере. В группе исследования у 40,4% обследованных женщин молекулярно-биологическими методами было выявлено ДНК ПВЧ высокоонкогенного типа, у 12,3% подтверждена дисплазия шейки матки цитологически.
Таким образом, результат проведенных исследований показал, что совместное использование ВПЧ-тестирования и цитологии позволяют увеличить чувствительность выявления предрака и рака шейки матки до 96-99% и увеличить рекомендуемые интервалы между регулярными (скрининговыми) обследованиями до 5-7 лет. Последнее возможно, так как у пациенток с отрицательным результатом ВПЧ-теста (включая группу с цитологическими L-SIL и ASC-US) в течение 5-7 лет не происходит развития тяжелой дисплазии. Такой подход позволил, с одной стороны, повысить эффективность цитологического метода, а с другой – разрешать сомнительные результаты цитологического анализа без повторного забора клинического образца.
|
